HiPure HP Plant DNA Kit

HiPure HP Plant DNA Kit (D3187) está diseñado para extraer ADN genómico de tejidos vegetales con alto contenido de polisacáridos, polifenoles y metabolitos secundarios, en los que los flujos estándar basados en SDS suelen producir un bajo rendimiento o la copurificación de inhibidores.

El kit combina lisis basada en CTAB, extracción orgánica y purificación en columna de sílice para obtener una recuperación estable de ADN a partir de matrices vegetales complejas. El flujo de trabajo es especialmente adecuado para plantas leñosas, tejidos maduros y muestras con almidón que requieren una mayor capacidad de eliminación de impurezas.

Dentro del sistema de ADN vegetal de Magen, D3187 constituye la solución principal para muestras vegetales complejas, mientras que las muestras rutinarias pueden procesarse con D3164 y los flujos automatizados se realizan con D6351.

Flujo de trabajo

Descripción general del flujo de trabajo

HiPure HP Plant DNA Kit utiliza un flujo de trabajo con columna de sílice basado en CTAB para la purificación de ADN genómico a partir de muestras vegetales y de hongos, especialmente aquellas que contienen concentraciones elevadas de polisacáridos, polifenoles o pigmentos. Después de la molienda con nitrógeno líquido, la muestra se lisa con Buffer PAL o Buffer PAL/PVP-40. A continuación, se realiza una extracción con cloroformo para separar los residuos vegetales, las proteínas, los polisacáridos y los complejos formados entre CTAB y los contaminantes de la fase acuosa que contiene los ácidos nucleicos. Cuando se requiere ADN genómico libre de ARN, la fase acuosa clarificada se trata con RNase A, se ajusta con Buffer GWP y se carga en la columna de sílice para la unión, el lavado, el secado y la elución del ADN.

Lógica de manipulación de las muestras

Este flujo de trabajo ofrece una compatibilidad más amplia con muestras vegetales y de hongos que la ruta sencilla basada en SDS. La etapa con CTAB y cloroformo resulta especialmente útil cuando los lisados vegetales son viscosos, presentan coloración intensa o contienen concentraciones elevadas de metabolitos secundarios. Para muestras ricas en polifenoles, la ruta PAL/PVP-40 ayuda a mejorar el control de contaminantes antes de la purificación en columna. Una vez transferida la fase acuosa y establecidas las condiciones de unión, el procesamiento posterior sigue la secuencia universal de purificación de ADN en columna: unión, lavado, secado y elución.

Tiempo y características del flujo de trabajo

En condiciones habituales de procesamiento manual, el flujo de trabajo suele completarse en aproximadamente 50–75 minutos, dependiendo principalmente de la disrupción de la muestra, el tiempo de lisis con PAL o PAL/PVP-40, la separación de fases mediante cloroformo y el tratamiento opcional con RNase A. Esta ruta es adecuada para flujos de trabajo de extracción de ADN vegetal en los que la separación de contaminantes es más importante que minimizar al máximo el tiempo de procesamiento. Para consultar las condiciones detalladas paso a paso, las recomendaciones del flujo de trabajo y los tiempos estimados de procesamiento, consulte la Nota del flujo de trabajo en la sección de descargas.

Especificaciones

Principio de extracción

Los tejidos vegetales se lisan inicialmente mediante un sistema de tampón basado en CTAB, diseñado para romper las paredes celulares y solubilizar los ácidos nucleicos, al tiempo que evita la coprecipitación de polisacáridos.

Los polifenoles y los metabolitos secundarios se eliminan mediante extracción orgánica y separación selectiva de fases, permitiendo que el ADN permanezca en la fase acuosa.

En condiciones de alta concentración salina, el ADN genómico se une a la membrana de sílice, mientras que las proteínas residuales, los pigmentos y los inhibidores se eliminan mediante etapas de lavado sucesivas. A continuación, el ADN purificado se eluye para su uso en aplicaciones posteriores.

Características de ingeniería

Lisis basada en CTAB para muestras ricas en inhibidores

Extracción orgánica para la separación de impurezas

Purificación de ADN mediante membrana de sílice

Adaptado para matrices vegetales de alta complejidad

Validación técnica

HiPure HP Plant DNA Kit se validó utilizando diversas muestras vegetales, incluidas plantas leñosas ricas en polifenoles y materiales vegetales con alto contenido de polisacáridos. El ADN genómico extraído de sauce, naranja, melocotón, enebro, longán y granada mostró bandas nítidas de alto peso molecular superiores a 23 kb mediante electroforesis en gel de agarosa, lo que indica una buena integridad del ADN en muestras de plantas leñosas ricas en polifenoles.

También se realizaron pruebas adicionales con materiales vegetales ricos en polisacáridos, como hojas de lufa, hojas de aloe, hojas de caña de azúcar, hojas de plátano, hojas de batata, cebolla, patata y ajo. El ADN extraído presentó valores A260/280 principalmente comprendidos entre aproximadamente 1,88 y 2,18, con rendimientos de aproximadamente 5–32 µg en las condiciones evaluadas, lo que respalda una purificación fiable a partir de matrices vegetales difíciles.

La estabilidad de la extracción se evaluó utilizando 16 muestras de hojas frescas de algodón. El ADN purificado mostró bandas electroforéticas uniformes entre las muestras analizadas, con valores A260/280 principalmente comprendidos entre 1,75 y 1,87 y rendimientos de aproximadamente 12–17 µg, lo que indica una recuperación y pureza estables entre muestras replicadas de tejido vegetal.

En conjunto, los datos de validación respaldan el uso de HiPure HP Plant DNA Kit para la extracción de ADN genómico de alta pureza a partir de cultivos, plantas leñosas, muestras ricas en polisacáridos y otros materiales vegetales difíciles, con una calidad de ADN adecuada para PCR, SSR, AFLP, RAPD, Southern blot y otros flujos de trabajo de análisis molecular relacionados.

Kit Contents

Storage and Stability

This product can be stored dry at room temperature (15-25°C) and are stable for at least 18 months under these conditions.

HiPure HP Plant DNA Kit (D3187) está diseñado para muestras vegetales con alto contenido de polisacáridos y polifenoles, en las que los métodos de extracción estándar pueden producir un bajo rendimiento o una pureza insuficiente del ADN.

Para tejidos vegetales rutinarios con bajo contenido de inhibidores, pueden ser suficientes los flujos basados en SDS, como HiPure SF Plant DNA Kit (D3164) pueden ser suficientes.