Sistemas de extracción de ADN plasmídico

El método de purificación de ADN plasmídico debe seleccionarse según el número de copias del plásmido, el volumen de cultivo, el rendimiento requerido, el nivel de endotoxinas y el formato de procesamiento. Magen ofrece un sistema de extracción de ADN plasmídico que abarca minipreparaciones de rutina, preparaciones de alta concentración y producción de plásmidos a gran escala. La gama incluye protocolos con columnas de centrifugación, con apoyo de filtración y con perlas magnéticas, adaptados a la centrifugación manual, el procesamiento al vacío, el trabajo en placas de 96 pocillos y las plataformas de extracción automatizada.

El sistema abarca tres niveles de purificación según la aplicación. El ADN plasmídico de calidad estándar para biología molecular es adecuado para clonación, PCR, digestión con enzimas de restricción y secuenciación de rutina. El ADN plasmídico con bajo contenido de endotoxinas, inferior a 1 EU/µg, está destinado a la transfección celular y a otros procedimientos in vitro sensibles a las endotoxinas. Determinados productos de columna incluyen un procedimiento adicional de eliminación de endotoxinas para obtener ADN plasmídico libre de endotoxinas, con niveles inferiores a 0,1 EU/µg, destinado a la inyección en animales.

Se emplean distintas químicas de purificación según las características del plásmido, en lugar de aplicar un único sistema de unión a todos los vectores. Los protocolos mediados por alcohol permiten recuperar una amplia variedad de plásmidos y obtener rendimientos elevados con vectores de uso habitual y de alto número de copias. La unión mediada por altas concentraciones de sales mejora el control del ARN residual y permite obtener mediciones de concentración basadas en la densidad óptica (DO) más representativas del contenido de ADN plasmídico, por lo que resulta especialmente adecuada para plásmidos de medio o bajo número de copias. Para los vectores de alto número de copias que requieren un rendimiento total muy elevado o una recuperación a alta concentración, la precipitación selectiva del plásmido mediada por cationes se combina con la separación mediante columnas o perlas magnéticas, de modo que el rendimiento no dependa únicamente de la capacidad de adsorción fija de una membrana de sílice convencional.

Dentro de la gama, HiPure Plasmid Mini Kit (P1001) y MagPure Plasmid Mini Kit (P1811) son los productos de referencia para la purificación estándar mediante columnas y perlas magnéticas, respectivamente. HiPure Plasmid EF Maxi Kit (P1156) es el principal sistema de columna para preparaciones de rutina con bajo contenido de endotoxinas, mientras que MagPure Plasmid EF Mini Kit (P1814) ofrece la opción correspondiente con perlas magnéticas. HiPure Plasmid EF Midi Plus Kit (P1231) está orientado a preparaciones de alta concentración, y HiPure HY Plasmid EF Mega Kit (P1116) es el producto principal para la producción de alto rendimiento. Los productos complementarios amplían cada línea según la escala de cultivo, el número de muestras que se procesan y la configuración del instrumento.

Para seleccionar entre protocolos de purificación estándar y de bajo contenido de endotoxinas según el número de copias, el volumen de cultivo de partida y el formato de procesamiento, consulte la Guía de compra de kits de ADN plasmídico.