El método de purificación de ADN plasmídico debe seleccionarse según los requisitos de pureza de la aplicación posterior, el número de copias del plásmido, el volumen de cultivo de partida, el rendimiento esperado y el formato de procesamiento. Un procedimiento de clonación de rutina no requiere la misma estrategia de purificación que la transfección celular, la inyección en animales, la preparación de plásmidos a alta concentración o la producción a escala de miligramos.
Magen ofrece sistemas de preparación de ADN plasmídico de calidad estándar para biología molecular, con bajo contenido de endotoxinas y libre de endotoxinas, basados en columnas de centrifugación, columnas con filtración auxiliar, placas de 96 pocillos y plataformas de perlas magnéticas. La gama se organiza en torno a seis productos principales. Los productos complementarios amplían cada línea según la escala de cultivo, el número de copias del plásmido, el rendimiento previsto o la configuración del instrumento.
| Grado de pureza | Nivel de endotoxinas | Aplicaciones habituales | Orientación para la selección |
| Calidad estándar para biología molecular | Sin especificación de preparación libre de endotoxinas (EF) | Clonación, PCR, digestión con enzimas de restricción y secuenciación de rutina | Líneas P1001 o P1811 |
| Bajo contenido de endotoxinas | <1 EU/µg | Transfección celular y procedimientos in vitro sensibles a las endotoxinas | Seleccione según el número de copias, el rendimiento requerido y el formato manual o automatizado |
| Libre de endotoxinas | <0,1 EU/µg | Inyección en animales y otros procedimientos que requieren ADN plasmídico de calidad apta para inyección | Seleccione productos con un protocolo específico o adicional para obtener preparaciones libres de endotoxinas |
Para plásmidos de medio o bajo número de copias, construcciones de gran tamaño o procedimientos que requieren reducir la interferencia del ARN, considere primero un método mediado por altas concentraciones de sales. La unión mediada por alcohol permite recuperar una amplia variedad de plásmidos y es adecuada para plásmidos de uso habitual o de alto número de copias cuando la prioridad es la recuperación total. La precipitación selectiva mediada por cationes está destinada a plásmidos de alto número de copias que requieren un rendimiento total muy elevado o una recuperación a alta concentración.
Un rendimiento total elevado y una concentración final alta están relacionados, pero no constituyen el mismo objetivo de selección. P1116 y sus formatos complementarios están diseñados para obtener cantidades totales elevadas de ADN a partir de plásmidos de alto número de copias. P1231 y sus productos relacionados se centran en la recuperación a alta concentración mediante enriquecimiento selectivo y elución en volúmenes reducidos.
Utilice sistemas de columnas de centrifugación o con filtración auxiliar para un procesamiento manual flexible, placas de columnas de 96 pocillos para preparaciones en paralelo, configuraciones de manejo de líquidos para la transferencia programable de reactivos y sistemas de perlas magnéticas para el procesamiento automatizado por lotes. La compatibilidad con el instrumento debe evaluarse junto con el número de muestras que se necesita procesar y la posibilidad de añadir reactivos durante la ejecución.
| Método | Uso recomendado | Característica principal | Consideraciones para la selección | Productos representativos |
| Mediado por alcohol | Plásmidos de uso habitual y de alto número de copias | Recuperación de una amplia variedad de plásmidos y rendimiento total elevado | Puede recuperarse ARN junto con el ADN, especialmente cuando la abundancia del plásmido es baja; cuando sea necesario, la concentración determinada por densidad óptica (DO) debe interpretarse junto con los resultados de electroforesis | Líneas P1001, P1156B y P1811 |
| Mediado por altas concentraciones de sales | Plásmidos de medio, bajo y muy bajo número de copias | Menor interferencia del ARN y cuantificación por DO más representativa del contenido de ADN plasmídico | La relación A260/A230 puede ser menor en determinadas condiciones de bajo rendimiento; el método prioriza la selectividad frente al rendimiento aparente máximo medido por DO | P1154, P1157, P1230, P1814 y P1816 |
| Mediado por cationes | Plásmidos de alto número de copias | Enriquecimiento selectivo de plásmidos para obtener un rendimiento total elevado o una recuperación a alta concentración, sin depender únicamente de la capacidad fija de la membrana | No es la opción preferente para construcciones grandes de medio o bajo número de copias; confirme el rendimiento plasmídico esperado por mililitro antes de seleccionar el método | Líneas P1116, P1231 y P1815 |
| Producto | Formato | Grado de pureza | Volumen de cultivo y rendimiento | Tipo de plásmido | Criterio de selección |
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HiPure Plasmid Mini Kit (P1001) PRINCIPAL |
Columna de centrifugación Mini | Estándar |
1–5 mL Hasta 35 µg |
Plásmidos en general | Preparación manual de rutina para clonación, PCR, digestión y secuenciación |
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HiPure Plasmid Mini Kit II (P1002) |
Columna Mini para mayor volumen de cultivo | Estándar |
5–15 mL Hasta 70 µg |
Plásmidos en general | Mayor volumen de cultivo de partida manteniendo el formato de minipreparación de rutina |
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HiPure Plasmid Plus 96 Kit (P1006) |
Placa de columnas de 96 pocillos | Estándar |
1,5 mL/pocillo Hasta 20 µg |
Plásmidos en general | Cribado en paralelo y preparación por lotes sin separación magnética |
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HiPure FastFilter Plasmid Midi Kit (P1013) |
Columna Midi + FastFilter | Estándar |
25–50 mL Hasta 250 µg |
Plásmidos en general | Preparación a escala intermedia con clarificación rápida del lisado mediante filtración |
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HiPure FastFilter Plasmid Maxi Kit (P1014) |
Columna Maxi + FastFilter | Estándar |
100–200 mL Hasta 1 mg |
Plásmidos en general | Preparación estándar a gran escala con clarificación más rápida |
| Producto | Formato | Grado de pureza | Volumen de cultivo y rendimiento | Tipo de plásmido | Criterio de selección |
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HiPure Plasmid EF Maxi Kit (P1156) PRINCIPAL |
Columna de centrifugación Maxi |
Bajo contenido de endotoxinas; libre de endotoxinas mediante el protocolo adicional |
100–200 mL 100–1500 µg |
Plásmidos de alto, medio y bajo número de copias | Amplia compatibilidad para preparaciones EF de rutina; protocolos para transfección e inyección en animales en un mismo producto |
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HiPure Plasmid EF Mini Kit (P1154) |
Columna de centrifugación Mini | Bajo contenido de endotoxinas |
5–15 mL Hasta 70 µg |
Especialmente plásmidos de medio o bajo número de copias | Protocolo Mini con alta concentración de sales y menor interferencia del ARN para transfección |
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HiPure Plasmid EF 96 Kit (P1157) |
Placa de columnas de 96 pocillos | Bajo contenido de endotoxinas |
1,3–1,5 mL/pocillo Hasta 20 µg |
Plásmidos en general, especialmente de medio o bajo número de copias | Preparación en paralelo con bajo contenido de endotoxinas y control del ARN residual mediante alta concentración de sales |
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HiPure Plasmid EF Mega Kit (P1159) |
Columna de gran formato | Libre de endotoxinas |
200–500 mL Hasta 2000 µg |
Plásmidos de alto, medio y bajo número de copias | Preparación a mayor escala de ADN plasmídico apto para inyección, con amplia compatibilidad con distintos vectores |
| Producto | Formato | Grado de pureza | Volumen de cultivo y rendimiento | Tipo de plásmido | Criterio de selección |
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HiPure HY Plasmid EF Mega Kit (P1116) PRINCIPAL |
Protocolo Mega con filtro y columna |
Bajo contenido de endotoxinas; libre de endotoxinas mediante el protocolo adicional |
500 mL Hasta 5 mg |
Plásmidos de alto número de copias | Método principal mediado por cationes para la producción de ADN plasmídico a escala de miligramos |
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HiPure HY Plasmid EF 96 Kit (P1115) |
Placa de filtración de 96 pocillos | Bajo contenido de endotoxinas |
1–5 mL/pocillo Hasta 50 µg |
Plásmidos de alto número de copias con un rendimiento ≥3 µg/mL | Preparación de alto rendimiento en 96 pocillos para transfección; no destinada a construcciones grandes de bajo número de copias |
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HiPure HY Plasmid EF Giga Kit (P1117) |
Protocolo Giga con filtro y columna |
Bajo contenido de endotoxinas; libre de endotoxinas mediante el protocolo adicional |
1–1,5 L Hasta 10 mg |
Plásmidos de alto número de copias | Escala de producción superior a P1116, manteniendo el mismo principio de alto rendimiento |
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HiPure HY Plasmid EF 10L Kit (P1118) |
Protocolo de producción a escala de varios litros |
Bajo contenido de endotoxinas; libre de endotoxinas mediante el protocolo adicional |
10–15 L Hasta 100 mg |
Plásmidos de alto número de copias | Configuración de mayor rendimiento total para la producción de ADN plasmídico a partir de varios litros de cultivo |
| Producto | Formato | Grado de pureza | Volumen de cultivo y rendimiento | Tipo de plásmido | Criterio de selección |
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HiPure Plasmid EF Midi Plus Kit (P1231) PRINCIPAL |
Columna compacta + extensor |
Bajo contenido de endotoxinas; libre de endotoxinas mediante el protocolo adicional |
25–50 mL Hasta 500 µg |
Plásmidos de alto número de copias | Enriquecimiento selectivo mediado por cationes y elución en un volumen reducido para recuperar ADN plasmídico a alta concentración |
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HiPure Low Copy Plasmid EF Kit (P1230) |
Columna compacta con química de alta concentración de sales | Bajo contenido de endotoxinas |
20–100 mL Hasta 100 µg |
Plásmidos de bajo y muy bajo número de copias, incluidas construcciones lentivirales de bajo número de copias | Mayor volumen de cultivo de partida y selectividad a alta concentración de sales para vectores de baja abundancia |
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HiPure Plasmid EF Maxi Plus Kit (P1233) |
Columna Maxi con enriquecimiento selectivo |
Bajo contenido de endotoxinas; libre de endotoxinas mediante el protocolo adicional |
100–200 mL Hasta 1,5 mg |
Plásmidos en general | Recuperación de ADN plasmídico a alta concentración y mayor escala, con elución en aproximadamente 300 µL |
| Producto | Formato | Grado de pureza | Volumen de cultivo y rendimiento | Tipo de plásmido | Criterio de selección |
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MagPure Plasmid Mini Kit (P1811) PRINCIPAL |
Protocolo con perlas magnéticas en 96 pocillos | Estándar |
1,3–1,7 mL/pocillo Hasta 20 µg |
Plásmidos en general | Protocolo principal con perlas magnéticas y unión mediada por alcohol para la preparación de numerosas muestras por lotes |
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MagPure Fast Plasmid Mini LQ Kit (P1812) |
Estación de trabajo de manejo de líquidos | Estándar |
1–3 mL Hasta 20 µg |
Plásmidos en general | Eliminación de impurezas mediante perlas magnéticas y unión mediada por alcohol para un procesamiento rápido y con costes controlados en estaciones de manejo de líquidos |
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MagPure Fast Plasmid Mini KF Kit (P1813) |
Protocolo magnético de 96 canales con reactivos prellenados | Estándar |
1–3 mL Hasta 20 µg |
Plásmidos en general | Funcionamiento continuo del instrumento tras cargar las placas, sin añadir reactivos durante la ejecución |
| Producto | Formato | Grado de pureza | Volumen de cultivo y rendimiento | Tipo de plásmido | Criterio de selección |
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MagPure Plasmid EF Mini Kit (P1814) PRINCIPAL |
Protocolo magnético manual o automatizado | Bajo contenido de endotoxinas |
1–5 mL Hasta 15 µg |
Plásmidos de medio o bajo número de copias | Método principal con perlas magnéticas y alta concentración de sales, con menor interferencia del ARN, para transfección celular |
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MagPure Plasmid EF Midi Kit (High Copy) (P1815) |
Protocolo magnético Midi; configuraciones M8/M24 | Bajo contenido de endotoxinas |
Estándar: 50–75 mL / hasta 500 µg M8: 50–80 mL / hasta 500 µg M24: 100–200 mL / hasta 2000 µg |
Plásmidos de alto número de copias con un rendimiento >5 µg/mL | Método magnético de alto rendimiento mediado por cationes para transfección celular |
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MagPure Plasmid EF Midi Kit (Medium/Low Copy) (P1816) |
Protocolo magnético Midi; configuraciones M8/M24 | Bajo contenido de endotoxinas |
Estándar/M8: 50–75 mL / hasta 250 µg M24: 100–200 mL / hasta 1000 µg |
Plásmidos de medio o bajo número de copias | Método magnético con alta concentración de sales para mejorar el control del ARN residual en preparaciones destinadas a transfección celular |
El número de copias del plásmido está determinado principalmente por el origen de replicación del vector y sus elementos reguladores. Sin embargo, el rendimiento plasmídico real también depende de la cepa hospedadora, el tamaño y la secuencia del inserto, la selección con antibióticos, el medio de cultivo y las condiciones de crecimiento. Por tanto, los nombres de los vectores deben utilizarse como referencias prácticas y no como una clasificación absoluta del número de copias.
| Perfil plasmídico | Ejemplos habituales | Implicaciones para la selección |
| Habitualmente de mayor número de copias | Plásmidos de clonación derivados de pUC, de tipo pBluescript y de tipo pGEM; muchos vectores pequeños de clonación de uso habitual | Puede obtenerse una cantidad suficiente de ADN con un menor volumen de cultivo. Cuando la prioridad es la cantidad total recuperada, pueden seleccionarse métodos de alto rendimiento o de alta concentración. |
| Habitualmente de menor número de copias o de rendimiento variable | BAC, fósmidos, cósmidos, plásmidos de más de 10 kb, construcciones lentivirales y otros vectores funcionales de gran tamaño | Puede ser más adecuado utilizar un mayor volumen de cultivo y una purificación selectiva a alta concentración de sales. No debe asumirse que un método de alto rendimiento diseñado para plásmidos de alto número de copias mejorará la recuperación. |
Nota final para la selección: los volúmenes de cultivo y rendimientos indicados corresponden a los intervalos recomendados para cada protocolo y no constituyen una garantía de rendimiento para todos los vectores. Deben considerarse conjuntamente el número de copias del plásmido, las características del inserto, el crecimiento bacteriano y la capacidad de purificación. Para conocer las condiciones de trabajo detalladas y las instrucciones específicas de cada configuración, consulte la página y el protocolo del producto correspondiente.
