Detalles
Principio de extracción
Las muestras forenses, como cabello, uñas y huesos, suelen contener proteínas con un alto grado de entrecruzamiento y cantidades extremadamente limitadas de ADN. Por ello, una extracción eficaz requiere una digestión enzimática intensiva y una química de adsorción optimizada.
En el flujo de trabajo de MagPure Forensic DNA Kit, las muestras se digieren con Proteinase K y agentes reductores como DTT. La Proteinase K degrada las proteínas estructurales y las histonas, mientras que el DTT reduce los enlaces disulfuro de los tejidos queratinizados, facilitando la liberación del ADN de matrices con un elevado grado de entrecruzamiento. Una incubación prolongada permite la digestión gradual de los materiales complejos y mejora la recuperación de ADN en trazas.
Tras la digestión, las moléculas de ADN se unen a partículas magnéticas de sílice en condiciones caotrópicas. La elevada superficie específica de las partículas permite capturar eficazmente el ADN incluso a concentraciones muy bajas. Las impurezas y los inhibidores de la PCR se eliminan durante los lavados, y el ADN purificado se eluye en un pequeño volumen de tampón adecuado para la amplificación por PCR y el análisis STR.
Características técnicas
Adsorción de ADN mediante perlas magnéticas
Las partículas magnéticas de alta afinidad permiten adsorber eficazmente el ADN genómico en condiciones de unión optimizadas y enriquecer las moléculas de ADN presentes en lisados forenses diluidos.
Recuperación de ADN en trazas
La química de extracción y los tampones de unión están optimizados para recuperar ADN con baja cantidad de molde, habitual en las muestras forenses.
Compatibilidad con muestras degradadas
El flujo de purificación permite recuperar ADN fragmentado y minimiza la degradación adicional durante el proceso de extracción.
Flujo de trabajo preparado para automatización
El sistema es compatible con instrumentos automatizados de extracción de ácidos nucleicos y plataformas de purificación multicanal utilizadas en laboratorios forenses.
Menor manipulación de las muestras
La separación magnética elimina las centrifugaciones repetidas, reduce la manipulación manual y mejora la reproducibilidad del flujo de trabajo.
Validación técnica
MagPure Forensic DNA Kit se evaluó como flujo de extracción de ADN basado en perlas magnéticas para materiales forenses complejos, incluidos dientes, huesos, tejidos animales, uñas y muestras modelo con marcadores de ADN. La validación examinó la recuperación de ADN, la capacidad de amplificación por qPCR, la compatibilidad con STR, la manipulación magnética automatizada y la recuperación de marcadores analíticos en las condiciones evaluadas.
La extracción de ADN de dientes humanos se evaluó con entradas de 100 mg, 50 mg y 25 mg de material dental, seguidas de purificación magnética y elución en 60 µL. El rendimiento de ADN aumentó con la cantidad de muestra: 4,54–4,83 µg a partir de 100 mg, 2,60–2,98 µg a partir de 50 mg y 1,13–1,39 µg a partir de 25 mg. Todos los extractos dentales evaluados produjeron amplificación por qPCR, con valores Ct de 16,54–19,61, lo que respalda la recuperación de ADN amplificable a partir de material forense mineralizado.
La extracción de ADN de hueso se evaluó con material óseo envejecido y un volumen de elución de 80 µL. La unión en un solo pocillo produjo 4,00–4,90 µg de ADN, mientras que la configuración de unión en dos pocillos produjo 8,04–9,01 µg en las condiciones evaluadas. Los valores A260/A280 se mantuvieron entre 1,82 y 1,94. La electroforesis mostró una señal de ADN detectable con un ligero arrastre, coherente con la antigüedad de la muestra ósea evaluada.
El rendimiento de la extracción automatizada se evaluó adicionalmente con muestras representativas de tejido animal en una plataforma de extracción magnética S16. Las configuraciones de unión en uno y dos pocillos produjeron rendimientos comparables de 6,54–6,90 µg de ADN, con valores A260/A280 de 1,82–1,89. La electroforesis mostró bandas definidas de ADN genómico sin arrastre evidente por degradación, lo que respalda la consistencia de la manipulación magnética automatizada y de la elución.
La compatibilidad con flujos de trabajo STR se evaluó utilizando tipos de muestras forenses complejas. Tanto las uñas frescas como las envejecidas permitieron detectar los 25 loci completos, mientras que determinados materiales dentales frescos produjeron perfiles STR casi completos, con 23–24 loci detectados. Los materiales dentales envejecidos generaron perfiles STR parciales en el flujo de 25 loci evaluado. Estos resultados muestran que D6359D puede recuperar ADN amplificable de matrices forenses complejas; no obstante, la interpretación STR de materiales mineralizados envejecidos debe considerar el historial de conservación, la zona de muestreo, la calidad de la molienda y la cantidad de molde disponible.
La recuperación del marcador analítico DL2000 se evaluó con una entrada aproximada de 50 ng en condiciones de extracción magnética automatizada. La unión en un solo pocillo presentó tasas de recuperación del 92,35–94,51 %, mientras que la unión en dos pocillos mostró tasas del 81,76–84,90 %. La electroforesis macroscópica de DL2000 mostró patrones completos de bandas sin difusión ni degradación evidentes, lo que respalda el diseño de unión magnética, lavado y elución del flujo D6359D.
En conjunto, estos resultados respaldan el uso de D6359D como flujo de extracción de ADN forense con perlas magnéticas para matrices complejas. En las condiciones evaluadas, el kit permitió recuperar ADN amplificable de muestras mineralizadas, generar perfiles STR compatibles a partir de determinados materiales forenses, mantener un rendimiento consistente en la extracción automatizada y alcanzar una recuperación del marcador analítico superior al 80 %.
Aplicaciones habituales
El ADN genómico purificado con MagPure Forensic DNA Kit se utiliza habitualmente en flujos de análisis forense y de ADN en trazas, entre ellos:
• Identificación mediante ADN forense
• Purificación de ADN en trazas a partir de indicios biológicos
• Recuperación de ADN de raíces de cabello y uñas
• Extracción de ADN de manchas de sangre y semen
• Análisis de genotipado basado en PCR
• Flujos de trabajo para la obtención de perfiles STR
• Estudios de identificación humana
• Investigación en genética forense
Productos relacionados
Además de los indicios con cantidades traza, los laboratorios forenses suelen procesar una amplia variedad de muestras biológicas. Los siguientes sistemas de extracción de ácidos nucleicos se utilizan con frecuencia junto con MagPure Forensic DNA Kit.
• HiPure Bone DNA Kit (D3124) – purificación de ADN genómico de fragmentos óseos utilizados en identificación forense y estudios antropológicos
• HiPure Universal DNA Kit (D3018) – purificación de ADN genómico de muestras biológicas diversas, incluidos tejidos, sangre y líquidos corporales
• MagPure Universal DNA Kit (IVD3102) – purificación de ADN genómico con perlas magnéticas a partir de diversas muestras biológicas mediante instrumentos automatizados de extracción
Kit Contents
|
Contents
|
D635901D
|
D635902D
|
D635903D
|
|
Purification Times
|
48
|
96
|
480
|
|
MagPure Particles N
|
1.1 ml
|
2.2 ml
|
11 ml
|
|
Buffer ATL
|
40 ml
|
80 ml
|
2 x 200 ml
|
|
Buffer BGL
|
40 ml
|
80 ml
|
2 x 200 ml
|
|
Buffer BST1
|
60 ml
|
120 ml
|
550 ml
|
|
Buffer GW2*
|
20 ml
|
25 ml
|
2 x 50 ml
|
|
Proteinase K
|
50 mg
|
120 mg
|
2 x 220 mg
|
|
Protease Dissolve Buffer
|
5 ml
|
10 ml
|
30 ml
|
|
DTT
|
235 mg
|
235 mg
|
3 x 235 mg
|
|
Elution Buffer
|
10 ml
|
10 ml
|
30 ml
|
Prefilled Kit Contents
32/48 channel machine
|
Product
|
Contents and volume
|
D6359D-TL-06
|
|
Buffer BGL
|
|
80 ml
|
|
Buffer ATL
|
|
80 ml
|
|
Proteinase K
|
|
120 mg
|
|
Protease Dissolve Buffer
|
|
10 ml
|
|
DTT Powder
|
|
2 x 235 mg
|
|
Elution Buffer
|
|
5 ml
|
|
AS-Tip
|
|
12 pcs
|
2.0ml V
bottom plate
|
Row 1/7：empty
|
6 plates
|
Row 2/8：500μl Buffer BST1
|
Row 3/9：500μl Buffer BST1
|
Row 4/10：20μl MagPure Particles N
500μl Buffer GW2
Row 5/11：500μl Buffer GW2 (ethanol ~350ul)
|
Row 6/12：60μl Elution Buffer
|
96 channel machine
|
Product
|
Contents and volume
|
D6359D-F-96
|
D6359D-F-48
|
|
Buffer BGL
|
|
80 ml
|
40 ml
|
|
Buffer ATL
|
|
80 ml
|
40 ml
|
|
Proteinase K
|
|
120 mg
|
50 mg
|
|
Protease Dissolve Buffer
|
|
10 ml
|
5 ml
|
|
DTT Powder
|
|
235 mg
|
235 mg
|
|
Elution Buffer
|
|
5 ml
|
5 ml
|
|
96-Tip (AS)
|
|
1
|
1
|
Sample Plate 1
|
500μl Buffer BST1
|
1
|
1
|
Sample Plate 2
|
500μl Buffer BST1
|
1
|
1
|
Wash Plate 1
|
20μl MagPure Particles N
500μl Buffer GW2
|
1
|
1
|
Wash Plate 2
|
500μl Buffer GW2
|
1
|
1
|
Elute Plate
|
60μl Elution Buffer
|
1
|
1
|
Storage and Stability
Proteinase K should be stored at 2–8°C upon arrival. However, short-term storage (up to 12 weeks) at room temperature (15–25°C) does not affect their performance. DTT Powder is easily oxidized, should be shipped at -20~8°C and stored at -20°C upon arrival, keep dry. The remaining kit components can be stored at room temperature (15–25°C) and are stable for at least 18 months under these condition.
