HiPure Plant RNA Plus Kit

HiPure Plant RNA Plus Kit (R4150) está diseñado como una solución de extracción de ARN de amplia aplicabilidad para muestras vegetales de composición desconocida o variable, incluidos tejidos con polisacáridos y polifenoles que pueden interferir con los flujos estándar.

Los métodos convencionales de extracción de ARN basados en guanidina pueden verse afectados por la oxidación de polifenoles y la degradación del ARN en matrices vegetales complejas. R4150 aborda estos problemas combinando una lisis con baja concentración de guanidina, protección antioxidante y purificación mediante doble columna para mejorar la estabilidad del ARN y la eliminación de inhibidores.

Dentro del sistema de ARN vegetal de Magen, R4150 constituye el flujo de primera elección para la mayoría de las muestras vegetales, mientras que HiPure HP Plant RNA Mini Kit (R4165) se utiliza para tejidos más difíciles y ricos en inhibidores.

Flujo de trabajo

Descripción general del flujo de trabajo

HiPure Plant RNA Plus Kit utiliza un flujo de trabajo de sílice con doble columna para la purificación de ARN total a partir de muestras vegetales y de hongos convencionales, así como de muestras ricas en polifenoles y polisacáridos. Después de la molienda con nitrógeno líquido, la muestra se lisa con Buffer RLF suplementado con TCEP o β-mercaptoetanol para mejorar la lisis y proporcionar protección antioxidante. El lisado clarificado se hace pasar a través de una columna de filtración de ADN genómico, lo que permite que el ARN permanezca en el flujo pasante mientras se reduce el ADN genómico. A continuación, el flujo pasante que contiene ARN se ajusta con 0,4 volúmenes de etanol y se carga en la columna de ARN, donde el ARN se captura, se lava, se seca y se eluye con agua libre de RNasas.

Lógica de manipulación de las muestras

Este flujo de trabajo está diseñado para muestras vegetales y de hongos en las que los metabolitos secundarios, los polisacáridos o los compuestos fenólicos pueden interferir con la recuperación de ARN. El sistema de lisis basado en RLF, combinado con TCEP o β-mercaptoetanol, facilita una dispersión rápida de la muestra y ayuda a proteger el ARN frente a la degradación relacionada con la oxidación. La columna de filtración de ADN genómico proporciona una etapa inicial de reducción de ADN antes de establecer las condiciones de unión del ARN. Para aplicaciones que requieran una eliminación más completa del ADN, puede incorporarse una digestión opcional con DNasa en columna después de la unión del ARN.

Tiempo y características del flujo de trabajo

En condiciones habituales de procesamiento manual, el flujo de trabajo suele completarse en aproximadamente 35–45 minutos, dependiendo principalmente de la molienda de la muestra, la viscosidad del lisado, la filtración del ADN genómico y la carga de la columna. Si se incluye la digestión opcional con DNasa en columna, el tiempo del flujo de trabajo aumenta aproximadamente entre 15 y 20 minutos. Esta ruta es adecuada para laboratorios que requieren un flujo de trabajo rápido de extracción de ARN vegetal con doble columna y una mayor tolerancia frente a matrices vegetales complejas. Para consultar las condiciones detalladas paso a paso, las recomendaciones del flujo de trabajo y los tiempos de procesamiento estimados, consulte la Nota del flujo de trabajo en la sección de descargas.

Principio de extracción

Los tejidos vegetales se lisan mediante un sistema de tampón con baja concentración de guanidina, diseñado para liberar el ARN y minimizar al mismo tiempo la coextracción de compuestos inhibidores.

Durante la lisis se incorpora un componente antioxidante para reducir los efectos de la oxidación asociados a las muestras ricas en polifenoles. El ADN genómico se elimina mediante una columna específica de eliminación de ADN antes de la purificación del ARN.

A continuación, el ARN se captura en una membrana de sílice bajo condiciones selectivas de unión y se purifica mediante etapas de lavado sucesivas. El ARN purificado se eluye para su uso en aplicaciones moleculares posteriores.

Características de ingeniería

Lisis con baja concentración de guanidina y protección antioxidante

Sistema reductor sin olor intenso

Estrategia de eliminación de ADN con doble columna

Amplia compatibilidad con distintos tipos de muestras

Condiciones optimizadas de carga de la columna

Validación técnica

HiPure Plant RNA Plus Kit se evaluó como un sistema de extracción de ARN vegetal de amplia compatibilidad para muestras vegetales convencionales, muestras ricas en polisacáridos y muestras ricas en polifenoles. La validación se realizó con 100 mg de hojas vegetales y un flujo de trabajo de doble columna compuesto por una gDNA Filter Column seguida de una HiPure RNA Mini Column. El rendimiento, la pureza y la integridad del ARN se evaluaron mediante Nanodrop y electroforesis en gel de agarosa.

En las matrices vegetales evaluadas, el kit permitió obtener cantidades medibles de ARN tanto de muestras rutinarias como de muestras difíciles, incluidas hojas de ficus, mango, eucalipto, té, níspero, uva, rosa, batata, morera de papel, pimiento y tomate. En las condiciones evaluadas y a partir de 100 mg de hojas vegetales, los rendimientos de ARN oscilaron entre aproximadamente 12,1 µg en hojas de té y 51,5 µg en hojas de batata. Las muestras con mayor rendimiento, como mango, morera de papel, batata, pimiento y tomate, produjeron aproximadamente entre 29,6 y 51,5 µg de ARN.

El kit también se evaluó utilizando TCEP como agente reductor sin olor intenso, en comparación con 2-mercaptoetanol. En varias de las muestras analizadas, la extracción con TCEP produjo rendimientos de ARN similares o superiores y mejores valores de A260/230 que el 2-mercaptoetanol en las condiciones evaluadas. Por ejemplo, en hojas de mango, el rendimiento aumentó de 36,42 µg a 45,35 µg de ARN, mientras que el valor A260/230 mejoró de 1,23 a 2,10. En hojas de uva, el rendimiento aumentó de 21,17 µg a 22,74 µg, y el valor A260/230 mejoró de 1,31 a 2,05.

Una prueba comparativa frente a un kit de referencia para la extracción de ARN vegetal de muestras ricas en polisacáridos y polifenoles mostró que HiPure Plant RNA Plus Kit proporcionó una integridad del ARN y un control del fondo de ADN comparables, además de valores A260/230 generalmente superiores en muestras vegetales difíciles. Sin digestión con DNasa, el análisis por electroforesis no mostró contaminación evidente por ADN genómico en las muestras evaluadas, lo que respalda la eficacia de la gDNA Filter Column para la reducción rutinaria de ADN. Estos resultados respaldan el uso de R4150 como flujo de trabajo de primera elección para la extracción de ARN de muestras vegetales desconocidas, variables o ricas en inhibidores, especialmente cuando no puede predecirse la composición de la muestra.

Kit Contents

Storage and Stability

Except TCEP, the kit components can be stored dry at room temperature (15–25°C) and are stable for at least 18 months under these conditions. After receiving the product, it is recommended to store TCEP (dry powder) at -20-8°C. At low temperatures, Buffer RLF may form precipitates, dissolve it completely by 55°C water bath.

HiPure Plant RNA Plus Kit (R4150) se recomienda como sistema de primera elección para muestras vegetales desconocidas o variables por su amplia compatibilidad con distintos tipos de tejido vegetal.

Para muestras vegetales rutinarias con bajo contenido de inhibidores, HiPure Plant RNA Mini Kit (R4151) o HiPure Plant RNA Midi Kit (R4152) pueden ser suficientes.

Para muestras vegetales difíciles con niveles elevados de inhibidores, pueden considerarse flujos basados en CTAB, como HiPure HP Plant RNA Mini Kit (R4165) puede considerarse.

Para consultar la guía de selección completa:

👉 Guía de selección para la extracción de ADN y ARN de plantas