Introducción
Las muestras de sangre contienen múltiples fuentes de ADN, incluido ADN genómico de leucocitos, ADN mitocondrial, ADN circulante liberado por células apoptóticas y ADN procedente de virus o microorganismos presentes en la sangre. Estos ácidos nucleicos son dianas importantes en diagnóstico molecular y se utilizan ampliamente en flujos de investigación como la amplificación por PCR, el análisis de genotipado y los estudios de tipificación HLA.
Sin embargo, la purificación de ADN genómico a partir de sangre plantea varios desafíos técnicos. La sangre es un material biológico potencialmente infeccioso y requiere una manipulación segura durante la preparación de la muestra. Además, contiene componentes complejos y sustancias inhibidoras que pueden interferir con los análisis moleculares posteriores. Los métodos tradicionales de extracción de ADN, como la extracción con fenol-cloroformo o la precipitación salina, suelen requerir pasos previos para separar los leucocitos mediante la eliminación de eritrocitos. Durante este proceso, los patógenos pueden permanecer activos en el lisado residual, lo que supone riesgos potenciales para el personal de laboratorio y el medioambiente. Asimismo, los ácidos nucleicos presentes fuera de los leucocitos, incluido el ADN circulante, viral o microbiano, pueden perderse parcialmente durante la eliminación de eritrocitos.
El HiPure Blood DNA Mini Kit (D311102) desarrollado por Magen utiliza una tecnología optimizada de purificación con columna de centrifugación y membrana de sílice que permite lisar directamente muestras de sangre total sin separar previamente los leucocitos. La sangre total se mezcla directamente con el tampón de lisis y la proteasa, lo que favorece una digestión eficaz de los componentes biológicos y la inactivación de patógenos durante la extracción. Este flujo simplifica la preparación de la muestra y mejora la seguridad del laboratorio.
El sistema permite purificar aproximadamente 200–250 μl de sangre total anticoagulada y produce ADN genómico de alta calidad adecuado para amplificación por PCR, flujos de genotipado y aplicaciones de tipificación HLA. El formato de columna de centrifugación permite una purificación rápida con centrífugas de laboratorio estándar y se integra fácilmente en flujos rutinarios de biología molecular.
Dentro de los Sistemas Magen de extracción de ADN de sangre, HiPure Blood DNA Mini Kit representa el flujo de referencia basado en columna para purificar ADN genómico de sangre total. Los laboratorios que necesitan extracción automatizada pueden utilizar el MagPure Blood DNA Kit (D6311), mientras que los laboratorios que procesan muestras biológicas mixtas pueden consultar el HiPure Universal DNA Kit (D3018).
Detalles
Especificaciones
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Características
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Especificaciones
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Funciones principales
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Aislamiento de ADN total a partir de 200 μl de sangre total
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Aplicaciones
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PCR, Southern blot, detección de virus, etc.
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Método de purificación
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Minicolumna de centrifugación
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Tecnología de purificación
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Tecnología de sílice
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Método de procesamiento
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Manual (centrifugación o vacío)
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Tipo de muestra
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Sangre total (fresca o congelada), suero, plasma, leche, saliva, otras muestras líquidas y células cultivadas
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Cantidad de muestra
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<200μl de sangre total u otras muestras líquidas
<5 × 106 linfocitos o células cultivadas
Animales no mamíferos que presentan núcleo en los eritrocitos (ricos en ADN, como aves y peces) : 5–20μl de sangre total por extracción
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Volumen de elución
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≥20 μl
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Tiempo por ejecución
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≤30 minutos
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Volumen líquido admitido por columna
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800 µl
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Capacidad de unión de la columna
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100 µg
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Características de ingeniería
Química de lisis directa de sangre total
El tampón de lisis optimizado permite una disrupción eficaz de las células sanguíneas sin separar previamente los leucocitos. Esto reduce el número de pasos y minimiza la posible pérdida de ADN durante el procesamiento.
Adsorción mediante membrana de sílice compuesta
La matriz de la columna está diseñada para ofrecer una capacidad estable de unión al ADN y reducir la obstrucción durante el procesamiento de lisados de sangre total. La estructura de la membrana permite adsorber eficazmente el ADN genómico, mientras que las proteínas y los restos celulares se eliminan durante los lavados.
Eliminación optimizada de inhibidores
Los inhibidores derivados de la sangre, como la hemoglobina y los contaminantes proteicos, se eliminan eficazmente mediante el sistema de lavado, generando ADN genómico purificado compatible con PCR y ensayos de genotipado.
Flujo de trabajo con centrífuga estándar
El formato de columna permite realizar la extracción con centrífugas de laboratorio habituales, sin instrumentos especializados, y favorece flujos de trabajo flexibles.
Validación técnica
Los experimentos internos de validación con muestras de sangre total humana anticoagulada demostraron una purificación estable de ADN genómico en múltiples muestras. Con aproximadamente 250 μl de sangre, los rendimientos típicos de ADN fueron de 6–10 μg, con relaciones de pureza A260/280 de aproximadamente 1,8–1,9, lo que indica ADN genómico de alta calidad adecuado para aplicaciones moleculares posteriores.
El análisis por electroforesis en gel de agarosa mostró bandas intactas de ADN genómico de alto peso molecular, sin degradación detectable, lo que confirma su idoneidad para amplificación por PCR y análisis de genotipado.
Las pruebas comparativas frente a varios sistemas comerciales habituales de purificación de ADN en columna mostraron rendimientos y pureza de ADN comparables, lo que respalda un rendimiento fiable en flujos rutinarios de biología molecular.
Aplicaciones habituales
• Amplificación por PCR
• Análisis de genotipado
• Estudios de tipificación HLA
• Investigación en diagnóstico molecular
• Estudios de genética de poblaciones
• Preparación de muestras para flujos de secuenciación
Productos relacionados
Para laboratorios que procesan distintos tipos de muestra o flujos de extracción, los siguientes sistemas se utilizan habitualmente junto con este kit:
• HiPure Universal DNA Kit (D3018) – purificación de ADN genómico a partir de muestras biológicas mixtas, incluidos tejidos, sangre, hisopos y líquidos corporales
• MagPure Blood DNA Kit (D6311) – purificación automatizada de ADN genómico de sangre total mediante perlas magnéticas
• MagPure Universal DNA Kit (IVD3102) – purificación de ADN genómico de múltiples tipos de muestras biológicas mediante perlas magnéticas
• MagPure Blood RNA Kit (R6611) – purificación automatizada de ARN total a partir de muestras de sangre anticoagulada
Kit Contents
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Contents
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D311102
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D311103
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Purification Times
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50
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250
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HiPure DNA Mini Columns I
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50
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2 x 125
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2ml Collection Tubes
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100
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5 x 100
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Buffer AL
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15 ml
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60 ml
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Buffer DW1
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30 ml
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150 ml
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Buffer GW2*
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12 ml
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50 ml
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Proteinase K
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24 mg
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120 mg
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Protease Dissolve Buffer
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1.8 ml
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10 ml
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Buffer AE
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15 ml
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60 ml
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Storage and Stability
Proteinase K should be stored at 2–8°C upon arrival. However, short-term storage (up to 12 weeks) at room temperature (15–25°C) does not affect their performance. The remaining kit components can be stored at room temperature (15–25°C) and are stable for at least 18 months under these conditions.
