Introducción
El MagPure Blood RNA Kit (R6611) está diseñado para purificar ARN total a partir de muestras de sangre total mediante tecnología de perlas magnéticas. La extracción de ARN de sangre presenta desafíos específicos debido a la presencia de RNasas y otros contaminantes que pueden degradar las moléculas de ARN durante el procesamiento.
El flujo con perlas magnéticas permite recuperar eficazmente ARN de sangre anticoagulada, capa leucocitaria y médula ósea. La separación magnética facilita los pasos automatizados de lavado y elución, favoreciendo una purificación uniforme en flujos automatizados.
Dentro de los sistemas Magen de extracción de ARN, MagPure Blood RNA Kit constituye una solución automatizada principal para purificar ARN a partir de muestras derivadas de sangre.
Detalles
Especificaciones
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Características
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Especificaciones
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Funciones principales
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Aislamiento de ARN total a partir de 1–1,5 ml de sangre total, 0,5–1 ml de médula ósea o capa leucocitaria
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Aplicaciones
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RT-PCR, síntesis de ADNc y secuenciación de nueva generación
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Método de purificación
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Perlas magnéticas polidispersas
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Tecnología de purificación
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Perlas magnéticas tecnología
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Método de procesamiento
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Manual o automatizado
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Tipo de muestra
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Sangre anticoagulada, linfocitos, capa leucocitaria, médula ósea y células cultivadas
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Cantidad de muestra
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1–1,5 ml de sangre total o 0,5–1 ml de médula ósea
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Rendimiento
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1–30 μg
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Características de ingeniería
Unión de ARN a perlas magnéticas
Las moléculas de ARN se unen selectivamente a las partículas magnéticas bajo condiciones de extracción optimizadas.
Química optimizada de lisis de sangre
El sistema de tampones lisa eficazmente las células sanguíneas y protege las moléculas de ARN frente a la degradación.
Compatibilidad con automatización
El flujo de extracción es compatible con sistemas automatizados de purificación de ácidos nucleicos que admiten procesamiento multicanal.
Menor manipulación manual
La separación magnética elimina las centrifugaciones repetidas y favorece flujos de purificación reproducibles.
Validación técnica
MagPure Blood RNA Kit se evaluó como un flujo de extracción de ARN total basado en perlas magnéticas para muestras de sangre anticoagulada. El flujo incluye lisis de eritrocitos, recuperación de leucocitos, lisis con Buffer RTL, unión del ARN a partículas magnéticas, digestión con DNase I, lavados magnéticos y elución con agua libre de RNasas. El kit puede utilizarse con manipulación magnética manual o adaptarse a plataformas automatizadas como KingFisher Flex.
Las pruebas de rendimiento se realizaron con 14 muestras de sangre fresca. El ARN se extrajo mediante el flujo MagPure Blood RNA, se cuantificó con NanoDrop 2000 y se analizó por electroforesis en gel de agarosa al 1,5 %. En las muestras evaluadas, las concentraciones de ARN fueron de 208,72–278,48 ng/µl, correspondientes a rendimientos totales de ARN de 20,87–27,85 µg bajo las condiciones de elución ensayadas. Los valores A260/280 se mantuvieron constantes en 2,10–2,14, mientras que los valores A260/230 variaron entre 1,26–2,00, reflejando una variación dependiente de la muestra.
La electroforesis en gel de agarosa mostró patrones nítidos de bandas de ARN en las 14 muestras, sin degradación evidente bajo las condiciones evaluadas. La inclusión de una digestión con DNase I contribuye a reducir el fondo de ADN genómico antes de la elución, un aspecto importante para ensayos posteriores basados en ARN sensibles al ADN residual.
En conjunto, estos resultados respaldan el uso de R6611 como flujo de extracción de ARN de sangre basado en perlas magnéticas para laboratorios que requieren una recuperación reproducible a partir de sangre anticoagulada, fracciones ricas en leucocitos u otras muestras hematológicas relacionadas. El ARN recuperado es adecuado para RT-PCR, PCR en tiempo real y preparación de bibliotecas orientadas a secuenciación; el rendimiento final depende del estado de la muestra, el contenido leucocitario y los requisitos del ensayo posterior.
Aplicaciones habituales
• Análisis de expresión génica en muestras de sangre
• Flujos de RT-PCR
• Estudios transcriptómicos
• Preparación de muestras para secuenciación de ARN
• Investigación en diagnóstico molecular basado en sangre
Productos relacionados
• MagPure Blood RNA Kit II (R6613) – purificación de ARN a partir de muestras de sangre fresca o congelada
• HiPure Blood RNA Kit (R4161) – purificación de ARN de sangre total mediante columna
• MagPure Universal RNA Kit (IVD3020) – purificación automatizada de ARN de tejidos y células cultivadas
• HiPure Universal miRNA Kit (R4310) – purificación de moléculas de ARN pequeño para estudios de ARN regulador
Kit Contents
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Contents
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R661101
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R661102
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R661103
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Purification Times
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48 Preps
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96 Preps
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480 preps
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10 x RBC Lysis Buffer
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50 ml
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2 x 50 ml
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4 x 100 ml
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Proteinase K
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12 mg
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24 mg
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120 mg
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Protease Dissolve Buffer
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1.8 ml
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1.8 ml
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10 ml
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DNase I
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600 μl
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2 x 600 μl
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10 x 600 µl
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DNase Buffer
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20 ml
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30 ml
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150 ml
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MagPure Particles N
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1.2 ml
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2.5 ml
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11 ml
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Buffer RTL
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30 ml
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60 ml
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300 ml
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Buffer ALB2
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40 ml
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60 ml
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300 ml
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Buffer MW1*
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22 ml
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44 ml
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220 ml
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Buffer MW2*
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20 ml
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50 ml
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2 x 100 ml
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RNase Free Water
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10 ml
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20 ml
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60 ml
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Kit Contents: Precast kit
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Cat.No
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Reagent
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R6611-TL-06
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10 x RBC Buffer
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2 x 50 ml
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Proteinase K
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24 mg
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Protease Dissolve Buffer
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1.8 ml
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DNase I
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2 x 600 μl
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DNase Buffer
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30 ml
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RTL Lysis Buffer
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60 ml
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Buffer ALB2
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60 ml
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AS Tip
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12 PCS
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2.0ml V-bottom plate
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Row 1/7：500µl Buffer MCB
Row 2/8：500µl Buffer MW1
Row 3/9：empty
Row 4/10：500µl Buffer MW2
20μl Magpure Particles N
Row 5/11：500μl Buffer MW2
Row 6/12：70μl RNase Free Water
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6 Plates
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Storage and Stability
DNase I should be shipped with ice pack or dry ice and stored at -20°C upon arrival. MagPure Particles N and Proteinase K should be stored at 2–8°C upon arrival. However, short-term storage(up to 8 weeks) at room temperature (15–25°C) does not affect their performance.The remaining kit components can be store at room temperature and are stable for up to 18 months under these conditions.
