Detalles
Especificaciones
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Características
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Especificaciones
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Funciones principales
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Aislamiento de ARN total a partir de 1 ml de sangre anticoagulada (sangre fresca, congelada o criopreservada), linfocitos, capa leucocitaria, médula ósea, células cultivadas, etc., mediante reactivos MagZol.
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Aplicaciones
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RT-PCR, síntesis de ADNc y secuenciación de nueva generación
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Método de purificación
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Perlas magnéticas polidispersas
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Tecnología de purificación
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Perlas magnéticas tecnología
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Método de procesamiento
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Manual o automatizado
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Tipo de muestra
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Sangre anticoagulada, linfocitos, capa leucocitaria, médula ósea y células cultivadas
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Cantidad de muestra
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1 ml de sangre total (fresca o congelada)
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Principios
Este producto se basa en un método de purificación con partículas magnéticas de alta capacidad de unión. La muestra se lisa y digiere con tampón de lisis y proteasa, liberando ARN/ADN en el lisado. Se añaden la solución de unión y las partículas magnéticas para adsorber ARN/ADN, mientras que las proteínas no se adsorben y se eliminan. Las partículas con ADN/ARN unido se lavan para retirar proteínas y otras impurezas, se lavan con etanol para eliminar sales y, finalmente, se someten a digestión con DNase para eliminar el ADN. El ARN se recupera añadiendo solución de unión y se eluye finalmente con un tampón de baja concentración salina. El ARN eluido puede utilizarse directamente en RT-PCR, NGS, detección de virus y otros ensayos.
Validación técnica
MagPure Blood RNA Kit II se evaluó como un flujo rápido basado en MagZol y perlas magnéticas para extraer ARN de sangre total y médula ósea. A diferencia de los procedimientos basados en lisis de eritrocitos, el protocolo R6613 utiliza lisis directa con MagZol 3BD, seguida de clarificación de fases, unión del ARN a partículas magnéticas, digestión con DNase I, lavados magnéticos y elución con agua libre de RNasas. Este diseño simplifica la preparación de muestras de ARN de sangre y permite trabajar con sangre fresca, sangre congelada, médula ósea y otras muestras derivadas de sangre.
Las pruebas de pretratamiento rápido se realizaron mezclando 1 ml de sangre o médula ósea con MagZol 3BD, seguido de una breve incubación a temperatura ambiente, incubación a 60 °C y clarificación antes de la extracción magnética. En muestras de médula ósea, las concentraciones de ARN fueron de 198,5–416,9 ng/µl, con rendimientos totales de 11,9–25,0 µg bajo las condiciones estándar de pretratamiento. Los valores A260/280 se mantuvieron alrededor de 2,1 y los valores A260/230 fueron de 1,8–2,1. Una muestra procesada sin Buffer BCP2 produjo un rendimiento superior de 55,3 µg, con A260/280 de 2,2 y A260/230 de 2,1 bajo las condiciones evaluadas.
Las muestras de sangre total mostraron una recuperación de ARN más dependiente de la muestra, como cabe esperar en especímenes con contenido leucocitario y condiciones de almacenamiento variables. En las muestras ensayadas, los rendimientos de ARN fueron de 1,8–8,9 µg para sangre humana y alcanzaron 32,7 µg en la muestra de sangre porcina evaluada. Los valores A260/280 fueron generalmente de 1,8–2,1 en muestras humanas y de 2,3 en la muestra porcina; los valores A260/230 variaron entre 1,0–1,8 en muestras humanas y alcanzaron 2,3 en la muestra porcina. Estos resultados indican que R6613 puede recuperar cantidades medibles de ARN de muestras de sangre sometidas a lisis directa, aunque el rendimiento final depende en gran medida del tipo de muestra, el contenido leucocitario y el estado de conservación.
La electroforesis en gel de agarosa mostró patrones visibles de bandas de ARN tanto en extractos de médula ósea como de sangre, lo que respalda la recuperación de ARN después del pretratamiento directo con MagZol y la purificación magnética. El flujo incluye digestión con DNase I para reducir el fondo de ADN genómico antes de la elución, favoreciendo su uso en análisis posteriores de ARN en los que el ADN residual podría interferir con la interpretación.
En conjunto, estos resultados respaldan R6613 como un flujo magnético práctico para laboratorios que requieren lisis directa de sangre fresca o congelada, médula ósea u otras muestras relacionadas, sin un paso independiente de lisis de eritrocitos. El formato de manipulación basado en MagZol 3BD también es compatible con flujos de conservación y transporte de sangre, donde la estabilización inmediata del ARN antes de la extracción es importante. El ARN recuperado es apto para RT-PCR, análisis de expresión génica y flujos orientados a secuenciación; el rendimiento final depende del estado de la muestra y de los requisitos del ensayo posterior.
Kit Contents
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Contents
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R661301
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R661302
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R661303
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Purification Times
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48 Preps
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96 Preps
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480 preps
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DNase I
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600 μl
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2 x 600 μl
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10 x 600 µl
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DNase Buffer C
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20 ml
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30 ml
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150 ml
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MagPure Particles N
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2.5 ml
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5.0 ml
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28 ml
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MagZol 3BD
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65 ml
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140 ml
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3 x 200 ml
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Buffer GW1*
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13 ml
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44 ml
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110 ml
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Buffer BCP2
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10 ml
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15 ml
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80 ml
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Buffer MW2*
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20 ml
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50 ml
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2 x 100 ml
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RNase Free Water
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10 ml
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20 ml
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60 ml
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Kit Contents: Precast kit
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Cat.No
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Reagent
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R6613-TL-06
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DNase I
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2 x 600 μl
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Magzol 3BD
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130 ml
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Buffer BCP2
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15 ml
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AS Tip
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12 PCS
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2.0ml V-bottom plate
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Row 1/7：350μl Isopropanol
15μl MagPure Particles N
Row 2/8：350μl Isopropanol
15μl MagPure Particles N
Row 3/9: 500μl DNase Buffer C
Row 4/10: 500μl Buffer GW1
Row 5/11: 500μl Buffer MW2
Row 6/12：70μl RNase Free Water
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6 Plates
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Storage and Stability
DNase I should be shipped with ice pack or dry ice and stored at -20°C upon arrival. MagPure Particles N, MagZol 3BD and Buffer BCP2 should be stored at 2–8°C upon arrival. However, short-term storage at room temperature (15–25°C) does not affect their performance. The remaining kit components can be stored at room temperature (15–25°C) and are stable for at least 18 months under these conditions.
