Introducción
HiPure Universal DNA Kit (D3018) está diseñado para purificar ADN genómico de una amplia variedad de muestras biológicas mediante columnas de centrifugación con membrana de sílice. La química de extracción optimizada permite recuperar eficazmente el ADN de matrices complejas, como sangre, tejidos, capa leucocitaria, líquidos corporales, hisopos, manchas de sangre seca y muestras de semen.
El kit combina la digestión con Proteinase K y la adsorción en membrana de sílice para liberar eficazmente el ADN genómico de las muestras biológicas y eliminar proteínas, lípidos y otros contaminantes. El ADN obtenido es adecuado para flujos habituales de biología molecular, como amplificación por PCR, análisis de genotipado y estudios de tipificación HLA.
Dentro de la gama de sistemas de extracción de ADN de Magen, HiPure Universal DNA Kit se presenta como una solución práctica basada en columnas para laboratorios que procesan distintos tipos de muestras en flujos habituales. En lugar de estar optimizado para una única matriz, ofrece una ruta de purificación común para numerosas muestras frecuentes, lo que resulta útil cuando se requieren tanto simplicidad operativa como una amplia compatibilidad de muestras.
Detalles
Flujo de trabajo
Descripción general del flujo de trabajo
HiPure Universal DNA Kit utiliza un flujo basado en columnas de sílice para purificar ADN total de muestras habituales, como tejidos, sangre, líquidos corporales, células cultivadas y materiales obtenidos con hisopos. Tras el pretratamiento específico de cada muestra, el ADN se libera mediante lisis asistida por proteasa, se captura en la membrana de sílice en condiciones de unión con etanol y se recupera mediante lavado, secado y elución.
Lógica de procesamiento de las muestras
La principal variación entre los distintos tipos de muestras se encuentra en el pretratamiento y la digestión. Los tejidos deben cortarse y digerirse completamente; las células cultivadas requieren resuspender el pellet antes de la lisis, mientras que la sangre y otras muestras líquidas suelen incorporarse de forma más directa a esta etapa. Una vez establecidas las condiciones de unión, las etapas posteriores de purificación son, en gran medida, comunes.
Tiempo y características del flujo de trabajo
En una operación manual habitual, el flujo completo para muestras rutinarias suele finalizar en aproximadamente 30–90 minutes, dependiendo principalmente del pretratamiento y de los requisitos de digestión. Para consultar las condiciones específicas de cada muestra, las indicaciones del flujo y los tiempos estimados de procesamiento, véase la Nota de flujo de trabajo específica por muestra en la sección Descargas.
Especificaciones
|
Características
|
Especificaciones
|
|
Funciones principales
|
Aislamiento de ADN total de tejidos, sangre, líquidos corporales, hisopos y manchas de sangre seca
|
|
Aplicaciones
|
PCR, qPCR, Southern blot, detección de virus, etc.
|
|
Método de purificación
|
Minicolumna de centrifugación
|
|
Tecnología de purificación
|
Tecnología de sílice
|
|
Método de procesamiento
|
Manual (centrifugación o vacío)
|
|
Tipo de muestra
|
Tejidos, células, sangre, saliva, hisopos, manchas de sangre, semen y otras muestras biológicas
|
|
Cantidad de muestra
|
Tejido sólido: 1–10 mg; sangre anticoagulada: 200 µL
|
|
Volumen de elución
|
≥20μl
|
|
Tiempo por procesamiento
|
30–90 minutos
|
|
Volumen de carga por columna
|
800µl
|
|
Capacidad de unión de la columna
|
100µg
|
Características técnicas
Amplia compatibilidad de muestras
La química de extracción permite purificar ADN genómico de numerosos tipos de muestras biológicas, como sangre total, capa leucocitaria, homogeneizados de tejido, líquidos corporales, hisopos y manchas de sangre seca. Esta flexibilidad hace que el sistema sea adecuado para laboratorios que procesan muestras de distinta procedencia.
Flujo de digestión con Proteinase K
Las muestras biológicas se lisan con Proteinase K y tampones de lisis optimizados para liberar eficazmente el ADN genómico de las estructuras celulares y los complejos de cromatina.
Adsorción de ADN en membrana de sílice
El ADN genómico se une selectivamente a la membrana de sílice en condiciones optimizadas, mientras que las proteínas y los contaminantes celulares se eliminan durante los lavados.
Rendimiento de purificación consistente
La membrana de la columna y la química de los tampones están optimizadas para mantener una recuperación consistente de ADN en distintas matrices biológicas.
Procesamiento con centrífugas de laboratorio convencionales
El flujo con columnas de centrifugación permite realizar la extracción con centrífugas habituales de laboratorio, sin necesidad de instrumentos especializados de purificación.
Validación técnica
Los ensayos de validación con distintos tipos de muestras biológicas demostraron una purificación consistente de ADN genómico, con relaciones de pureza generalmente de A260/A280 de aproximadamente 1,7–1,9, indicativas de ADN genómico de alta calidad adecuado para análisis moleculares posteriores.
Los experimentos con distintas muestras de tejido mostraron rendimientos reproducibles de ADN, con una variación entre extracciones replicadas generalmente inferior al 10 %, lo que demuestra un rendimiento de purificación consistente en múltiples tipos de muestras.
El ADN genómico purificado produjo bandas definidas de alto peso molecular en electroforesis en gel de agarosa y permitió amplificar correctamente por PCR fragmentos de genes diana, confirmando su compatibilidad con aplicaciones habituales como la amplificación por PCR y el análisis de genotipado.
Las pruebas comparativas con sistemas comerciales de purificación de ADN genómico de uso habitual mostraron una pureza y un rendimiento de recuperación de ADN comparables, lo que respalda una preparación fiable de ADN para los flujos habituales de laboratorio.
Aplicaciones habituales
El ADN genómico purificado con HiPure Universal DNA Kit es adecuado para numerosos flujos de investigación en biología molecular y diagnóstico molecular, entre ellos:
• Amplificación por PCR
• Análisis de genotipado
• Estudios de tipificación HLA
• Investigación en diagnóstico molecular
• Estudios de genética de poblaciones
• Preparación de muestras para flujos de secuenciación
• Procesamiento de muestras para biobancos
Productos relacionados
Para los laboratorios que extraen ácidos nucleicos de distintas muestras biológicas o amplían sus flujos moleculares, los siguientes sistemas se utilizan habitualmente junto con HiPure Universal DNA Kit.
• HiPure Blood DNA Mini Kit (D3111) – purificación de ADN genómico de muestras de sangre total anticoagulada
• MagPure Universal DNA Kit (IVD3102) – purificación de ADN genómico con perlas magnéticas a partir de muestras biológicas diversas para flujos automatizados de extracción
• HiPure Total RNA Plus Kit (R4111) – purificación mediante columnas de ARN total de alta pureza con eliminación de ADN genómico
• MagPure Universal RNA Kit (IVD3020) – purificación automatizada de ARN de tejidos y células cultivadas mediante perlas magnéticas
Kit Contents
|
Contents
|
D301802
|
D301803
|
|
Purification Times
|
50
|
250
|
|
HiPure DNA Mini Columns I
|
50
|
250
|
|
2ml Collection Tubes
|
100
|
500
|
|
Buffer ATL
|
30 ml
|
150 ml
|
|
Buffer AL
|
30 ml
|
150 ml
|
|
Buffer GW1
|
22 ml
|
88 ml
|
|
Buffer GW2
|
12 ml
|
50 ml
|
|
Proteinase K
|
24 mg
|
120 mg
|
|
Protease Dissolve Buffer
|
1.8 ml
|
10 ml
|
|
Buffer AE
|
15 ml
|
60 ml
|
Storage and Stability
Proteinase K should be stored at 2-8°C upon arrival. However, short-term storage (up to 12 weeks) at room temperature (15-25°C) does not affect their performance. The remaining kit components can be stored at room temperature (15-25°C) and are stable for at least 18 months under these conditions. The entire kit can be stored at 2-8°C, but in this case buffers should be redissolved before use. Make sure that all buffers are at room temperature when used.
Experiment Data
