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Principio de extracción
Las muestras óseas contienen matrices altamente mineralizadas y componentes estructurales ricos en proteínas que limitan la accesibilidad del ADN en comparación con los tejidos blandos. Por ello, una extracción eficiente requiere tanto disrupción mecánica como una digestión enzimática intensiva.
En el flujo de trabajo del kit, el polvo de hueso finamente molido se digiere con Proteinase K y un agente reductor (DTT). Las condiciones reductoras rompen los enlaces disulfuro de las proteínas de la matriz ósea, favoreciendo la digestión proteica y la liberación de las moléculas de ADN retenidas en la estructura mineralizada del tejido.
Tras la digestión, el ADN liberado se une a la membrana de sílice de la columna de purificación en condiciones caotrópicas. Los contaminantes se eliminan mediante etapas de lavado y el ADN purificado se eluye con un tampón de baja concentración salina adecuado para los análisis moleculares posteriores.
Características técnicas
Química optimizada para la digestión de muestras óseas
Las muestras óseas requieren una descalcificación y una digestión enzimática eficaces para liberar el ADN genómico retenido en las matrices de tejido mineralizado. El kit combina tampones de digestión y tratamiento con Proteinase K para favorecer la liberación eficiente del ADN de los fragmentos óseos.
Purificación de ADN genómico mediante membrana de sílice
Tras la digestión, el ADN genómico se une a la membrana de sílice en condiciones de unión optimizadas. Las proteínas, los lípidos y los subproductos de la digestión se eliminan durante las etapas de lavado para obtener ADN purificado.
Recuperación a partir de muestras complejas
El flujo de extracción está optimizado para materiales biológicos en los que el ADN puede encontrarse parcialmente degradado o en baja abundancia, una situación habitual en muestras forenses o históricas.
Flujo de trabajo con columna de centrifugación
El procedimiento de purificación utiliza centrífugas de laboratorio convencionales y no requiere instrumentos automatizados especializados para la extracción.
Validación técnica
Los ensayos de validación realizados con muestras biológicas complejas demostraron que la química de purificación basada en membrana de sílice permite recuperar de forma consistente ADN genómico adecuado para amplificación por PCR y análisis genéticos posteriores.
El flujo de purificación está optimizado para muestras con ADN en trazas o degradado, frecuentes en el ámbito forense, como fragmentos óseos, tejidos envejecidos u otros materiales biológicos complejos.
El ADN genómico recuperado produjo resultados claros de amplificación en ensayos basados en PCR, lo que demuestra su compatibilidad con los flujos de trabajo de genotipado utilizados habitualmente en laboratorios de ADN forense.
Aplicaciones habituales
El ADN genómico purificado con HiPure Bone DNA Kit se utiliza habitualmente en flujos de trabajo con muestras biológicas complejas o degradadas, entre ellos:
• Análisis de ADN forense
• Identificación de restos humanos
• Genotipado de muestras biológicas degradadas
• Amplificación por PCR de muestras con ADN en trazas
• Estudios antropológicos y arqueológicos de ADN
Productos relacionados
Los laboratorios que realizan análisis de ADN forense o degradado suelen combinar la purificación de ADN de muestras óseas con otros sistemas de extracción adaptados a diferentes materiales biológicos.
• MagPure Forensic DNA Kit (D6359D) – purificación con perlas magnéticas de ADN en trazas a partir de muestras forenses, como cabello, uñas, manchas de sangre y fragmentos óseos
• HiPure Universal DNA Kit (D3018) – purificación de ADN genómico de muestras biológicas diversas, incluidos tejidos, sangre y líquidos corporales
• MagPure Universal DNA Kit (IVD3102) – purificación de ADN genómico mediante perlas magnéticas a partir de diversas muestras biológicas para flujos automatizados de extracción
Kit Contents
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Contents
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D312402
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D312403
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Purification Times
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50
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250
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HiPure DNA Mini Columns I
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50
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250
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2ml Collection Tubes
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50
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250
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Buffer BGL
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40 ml
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180 ml
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Buffer GXP
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30 ml
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150 ml
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Buffer GW1*
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13 ml
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53 ml
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Buffer GW2*
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20 ml
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2 x 50 ml
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DTT Powder
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235 mg
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2 x 235 mg
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Proteinase K
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48 mg
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240 mg
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Protease Dissolve Buffer
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5 ml
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15 ml
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Elution Buffer
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15 ml
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60 ml
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Storage and Stability
This product can be stored at room temperature (15~25°C) for 18 months. Proteinase K/DTT dry powder can be transported and stored at room temperature. For long-term storage (>6 months), it is recommended to store at -20~8°C. Dissolved Proteinase K should be stored at -20~8°C. The dissolved DTT should be stored at -20°C.
